❶ 细胞冻存液中一般加哪几种有机溶剂,加多少冻存细胞一般是迅速还是
一般加DMSO,采用慢冻速溶的方法能较好的保证细胞存活。
❷ 细胞治疗中冻存细胞有什么建议
细胞冻存是比较重要的一步,冻存质量决定着细胞的生存质量和状态,对细胞株表达相应的抗体起着至关重要的作用,就算筛选出最好的表达量高的细...
❸ 细胞冻存液的组成是 DMSO DMEM 和血清,请问这个比例是多少呢
冻存液就用新鲜的细胞培养基,加DSMO至终浓度达5—20%。
❹ 细胞冻存液怎么配
10%-15%(常见为10%)的DMSO或甘油,含10%-20%血清的冻存培养液。
一般来讲血清含量可以在10%-90%之间调整,冻存液中加入血清一方面可以为细胞提供营养,另一方面可以在细胞冻存过程中提供非渗透性保护物质,如蔗糖,白蛋白等从而更好地保护细胞。
有人亲测10%血清冻存细胞,结果证明是可以的,但高血清比例的冻存液更有助于提高细胞活力,此外娇贵的细胞可以适当提高冻存液中血清的比例以保证获得更高的存活率及活力。
(4)上海bi细胞冻存液是哪些物质扩展阅读
细胞冻存和复苏的原则:
慢冻速融,这样更加有利于保持细胞的活力。冻存细胞不加任何保护剂,会导致细胞内冰晶的产生,从而使细胞产生内源性的机械损伤,引起细胞内环境渗透压,PH,电解质等的改变,进而促使细胞死亡。
常用的冻存保护剂为二甲基亚砜(DMSO)和甘油,冻存细胞时加入保护剂,一方面可以提高细胞膜对水的通透性,另一方面使冰点降低,延缓冻结过程。
缓慢冻存细胞的过程中,加入保护剂可以使细胞内水分渗出到细胞外,一定程度上减少胞内冰晶的产生,而在快速复苏细胞的过程中,能使胞外冰晶迅速融化,防止水分渗入胞内再次形成冰晶而损伤细胞。
❺ 配制细胞冻存液除了fbs,dmso,还需要什么试剂
细胞冻存是细胞培养、引种、保种和保证实验顺利进行的重要技术手段。在细胞建株和建系中,及时冻存原始细胞是十分重要的。在杂交瘤单克隆抗体的制备过程中,杂交瘤细胞、每次克隆化得到的亚克隆细胞的冻存保种常常是必不可少的实验操作。因为在没有建立一个稳定的细胞系或稳定分泌抗体的细胞系的时候,细胞的培养过程中随时可能因细胞的污染、分泌抗体能力的丧失或遗传变异等等导致实验失败,如果没有原始细胞的冻存,则因为上述的意外而前功尽弃。索莱宝细胞冻存常用冻存液的成分如下:20%血清(FBS)、10%DMSO、70%1640培养液;或90%血清(FBS)、10%DMSO,更可防止细胞内冰晶形成。将DMSO和FBS加入DMEM中,各自含量占总体积的10%,然后滤膜过滤后分装保存备用。
❻ 配细胞冻存液
细胞冻存
1.预先配制冻存液:10
%
dmso
+
90%胎牛血清,4℃冰箱保存预冷;
2.用胰酶对细胞进行消化:倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基,pbs冲洗两次,用胰酶消化细胞(尽可能温和);
3.再次用完全培养液悬浮细胞,将预冷的冻存液加入消化完全的细胞中,用滴管轻轻吹打混匀.
4.在每支冻存管中加入1ml细胞液,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期.
5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力,如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐)最好;或者可以在4℃,2h;然后转到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐.
这是我实验中用的protocol,
❼ 求细胞冻存液的主要作用及成分。越全越好。。
作用:可保护细胞免受溶液损伤和冰晶损伤。
渗透性冷冻保护剂:可以渗透到细胞内,一般是一些小分子物质,主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。
非渗透性冷冻保护剂:不能渗透到细胞内,一般是些大分子物质,主要包括聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及羟乙基淀粉等。
冷冻保护剂同溶液中的水分子结合,发生水合作用,弱化水的结晶过程使溶液的粘性增加从而减少冰晶的形成,同时冷冻保护剂可以通过在细胞内外维持一定的摩尔浓度,降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度,使细胞免受溶质的损伤。
渗透性冷冻保护剂的保护机制是在细胞冷冻悬液完全凝固之前,渗透到细胞内,在细胞内外产生一定的摩尔浓度,降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度,从而保护细胞免受高浓度电解质的损伤同时。细胞内水分也不会过分外渗,避免了细胞过分脱水皱缩。
(7)上海bi细胞冻存液是哪些物质扩展阅读:
保护剂使用注意
1.从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存,但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液。
2.将冻存管放入液氮容器或从中取出时,要做好防护工作,以免冻伤。
3.冻存和复苏最好用新配制的培养液。
❽ 求细胞冻存液的主要作用及成分。越全越好。。
细胞冻存液的作用是将活细胞冻存后,长期保存。
一般配置冻存液有两种配方
1.
培养基,血清,DMSO配比为7:2:1
2.
血清,DMSO配比为9:1